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醛缩酶的特性及测定方法提供试剂盒 [复制链接]

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醛缩酶是裂解酶的一种,狭义的指催化裂解1.6-二磷酸-D-果糖生成3-磷酸-D-甘油醛与α-二羟丙酮磷酸反应的酶(同时在糖异生中也可催化这个反应的逆反应),即指1.6-二磷酸-D-果糖醛缩酶(Ec4.1.2.13)。(广义的指催化同形式反应的酶,例如亦有将鼠李糖磷酸醛缩酶等统称为醛缩酶)。

一、概况

1、反应式

测定温度为30℃,最适pH为7.0。

2.米氏常数

3.专一性

酵母醛缩酶对果糖-1,6-二磷酸具有高度的专一性,但是,此酶与L-山梨糖-1,6-二磷酸反应速度仅为果糖-1,6-二磷酸反应速度的30%。

4.抑制剂

醛缩酶的抑制剂有Cu2+,Zn2+,Ag+和邻-苯菲绕啉。

5.纯度要求

所需纯度最低限度为9单位/毫克,所含的D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶与L-甘油-3-磷酸脱氢酶应分别小于0.01%与0.05%。

6.意义

醛缩酶可用来测定果糖-1,6-二磷酸。血清中醛缩酶对于肌病是一项关键性的诊断试验,并且对于心肌梗塞、肝病和急性精神病等病也有用处。

7.稳定性

此酶以3.2MpH7.6的硫酸铵悬浮液保存在4℃下,其稳定期可达6个月之久。pH值小于4.5,则使此酶发生不可逆变性。

二、测定方法

反应式

经Jagannathan等改进的反应式:

可在nm处跟踪吸光率的增量。一个单位即定为在规定的条件下温度为25℃,每分钟能使吸光率增量变化为1.00时所需的活性。

2.偶联法

按反应式(5)在nm处测量吸光率的减量,并由此可计算出酶活性。活性(以毫单位/毫升醛缩酶表示)即等于吸光率差值ΔA(10分钟)x(于37℃)。

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